你知道核酸报告是如何诞生的吗?( 二 )
拿到“身份证”的核酸样本并不能直接测试 , 而是要先提取核酸 , 对其进行扩增 。因此 , 核酸样本“奇幻漂流”的下一站 , 是PCR加样区——简单来说 , 检验人员要把病毒的遗传物质(核糖核酸)给“揪出来” 。
此时 , 检验人员戴着双层手套 , 在生物安全柜内一管一管地拧开螺旋盖 , 手工吸取样本 , 加入核酸提取板孔中 , 再拧上螺旋盖将标本放回原处 。检验人员与新冠病毒“擦肩而过”的距离可能只隔着两层乳胶手套——也就是2毫米 , 但核酸检测工作不允许他们害怕 。
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检验人员正在进行核酸提取环节中的加样步骤 。
获得核酸后 , 检验人员用移液枪将核酸转移至事先准备好反应液的反应管里 , 制成反应体系 , 让它进入“奇幻漂流”的下一站:扩增分析区 。
不能出错 , 不能有遗漏 , 不能发生生物安全事故 。可以说检验人员全身时刻处于高度紧张的状态 。就单说‘加样’ , 检验人员要用极小的枪头将每个提取好的核酸 , 大概是一滴水的四分之一加入到试剂中 , 每一步操作都必须十二分谨慎 。开盖、加样虽然有仪器 , 但现有的仪器在速度上并不能令人满意 , 遇上大样本筛查只能靠手工操作 。
让它变多才能检测出来
经历了复杂费时的前期制备过程 , 样本终于来到了“奇幻漂流”的关键一站 。样本的采样质量如何、核酸提取的质量如何、结果如何都将在此处见分晓 。
这里不得不提一下曾斩获诺贝尔奖的聚合酶链反应(PCR) , 这是20世纪80年代中期发展起来的一项体外核酸扩增技术 , 它可以将目标基因片段于数小时内扩增百万倍至数亿倍 , 成为当今生命科学研究最为重要且广泛使用的技术手段之一 。
怎么理解扩增?
如果把样本提取出来的核酸看作是一块土地 , 新冠病毒是种子 , 如何知道土地里有没有种子?简单的方法是 , 加点水和肥料(试剂) , 让种子一个变两个、两个变四个、四个变八个……病毒是看不到的 , 而且微量样本也不容易检测到 , 所以要让它变多 , 才方便检测出来 。
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经过复杂的前期制备工作 , 才能在PCR仪上进行扩增检测 。上机后 , 就是历时约1.5小时扩增检测 , 而且中间不能有停顿、不能有断电、不能有仪器故障 , 核酸检测才能完成 。
当反应管在机器上开始检验后 , 也就意味着“开弓没有回头箭”——从采样到核酸制备任何一个环节出现问题都可能导致返工重测 , 从而使报告时间加倍 。
3月15日 , 国家卫健委发布《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第九版)》 。其中 , 《方案》将解除隔离管理和出院标准修改为“连续两次新型冠状病毒核酸检测N基因和ORF基因Ct值均≥35(荧光定量PCR方法 , 界限值为40 , 采样时间至少间隔24小时)” , 这也让很多“小白”知道 , 这儿的“Ct”并非到医院拍个CT , 而是指扩增的阈值 。简单来说 ,Ct值越低 , 说明阳性越强;Ct值越高 , 说明阳性越弱 。
作为初筛实验室 , 只能向疾控中心报告“疑似阳性” , 随后根据疾控的要求转运原管标本以供复核 。而PCR实验室也会通过紫外线消毒 , 通常阴性样本会储存一两天以备查验 。
向你飞奔而来的报告背后是汗水
检测人员还需要对扩增结果进行分析:包括同批随样本检测的阴阳性质控结果是否在控、基线设置、逐孔分析内标及样本结果是否正常等 。当阴阳性质控全部符合检测要求 , 排除假阴性、假阳性可能 , 对异常结果样本及时进行复核 , 确保无误后才能最终报告结果 。
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